ⅠN核酸iはじめに
核酸はデオキシリボ核酸(DNA)とリボ核酸(RNA)に分けられ、そのうちRNAは機能の違いによりリボソームRNA(rRNA)、メッセンジャーRNA(mRNA)、トランスファーRNA(tRNA)に分けられます。DNAは主に核、ミトコンドリア、クロロホルムに集中しており、RNAは主に細胞質に分布しています。核酸抽出は遺伝子発現の物質的基盤として、分子生物学研究や臨床分子診断において極めて重要な役割を果たしています。核酸抽出の濃度と純度は、その後の PCR、配列決定、ベクター構築、酵素消化、その他の実験に直接影響します。
Ⅱ 核酸の抽出・精製方法
① フェノール・クロロホルム抽出法
フェノール/クロロホルム抽出は DNA 抽出の古典的な方法で、主に 2 つの異なる有機溶媒を使用してサンプルを処理し、DNA ベースの核酸を水相に、脂質を有機相に、タンパク質を 2 つの相の間に溶解します。この方法には、低コスト、高純度、優れた効果という利点があります。デメリットとしては、操作が複雑で時間がかかることです。
②トリゾール法
Trizol 法は RNA 抽出の古典的な方法です。Trizol 法は、クロロホルムによる遠心分離の後、水相と有機相に分離され、RNA が水相に溶解し、水相を新しい EP チューブに移し、イソプロパノールを加えて沈殿を得た後、エタノール精製します。この方法は、動物組織、細胞、細菌からの RNA 抽出に適しています。
③遠心カラム精製方法
遠心分離カラム精製方法は、特殊なシリコンマトリックス吸着材を介してDNAを特異的に吸着し、RNAとタンパク質はスムーズに通過させることができ、高塩低PHを使用して核酸を組み合わせ、低塩高PH値の溶出を使用して核酸を分離および精製します。精製濃度が高く、安定性が高く、有機溶媒が不要で、コストが低いという利点があります。欠点は、段階的に遠心分離する必要があり、操作手順が増えることです。
④磁気ビーズ法
磁気ビーズ法は、ライセートを通して細胞組織サンプルを分割し、サンプル中の核酸を放出します。その後、タンパク質や糖などの不純物は磁気ビーズの表面に残されたまま、核酸分子が磁気ビーズの表面に特異的に吸着されます。液体。細胞組織の分割、磁性ビーズと核酸の結合、核酸洗浄、核酸溶出などの工程を経て、最終的に純粋な核酸が得られます。利点は、段階的な遠心分離を必要とせず、簡単な操作と短時間の使用です。技術要件が低く、自動および大量の操作を実現できます。磁性ビーズと核酸の特殊な組み合わせにより、高濃度および高純度の核酸が抽出されます。デメリットは、現在の市場価格が比較的高価であることです。
⑤その他の方法
上記4法のほかに、沸騰分解法、濃塩法、陰イオン界面活性剤法、超音波法、酵素法などがあります。
Ⅲ 核酸抽出の種類
Foregene は、世界をリードするダイレクト PCR プラットフォーム、ダブルカラム RNA 分離プラットフォーム (DNA のみ + RNA のみ) を備えています。主な製品には、DNA/RNA 分離キット、PCR 試薬およびダイレクト PCR 試薬、分子実験用試薬シリーズが含まれます。
①トータルRNA抽出
Total RNA 抽出サンプルには、血液、細胞、動物組織、植物、ウイルスなどが含まれます。Total RNA 抽出を通じて高純度、高濃度の Total RNA が得られ、RT-PCR、チップ分析、インビトロ翻訳、分子クローニング、ドットブロットおよびその他の実験。
フォージェネ関連RNA 分離キット
動物トータル RNA 分離キット--さまざまな動物組織から高純度、高品質のトータル RNA を迅速かつ効率的に抽出します。
細胞トータル RNA 分離キット--さまざまな培養細胞から高純度で高品質なトータルRNAを11分で取得できます。
植物トータル RNA 分離キット--多糖類とポリフェノールの含有量が低い植物サンプルから高品質のトータル RNA を迅速に抽出します。
ウイルスRNA分離キット--血漿、血清、無細胞体液、細胞培養上清などのサンプルからウイルス RNA を迅速に分離および精製します。
②ゲノムDNA抽出
ゲノム DNA 抽出サンプルには、土壌、糞便、血液、細胞、動物組織、植物、ウイルスなどが含まれます。ゲノム DNA 抽出は、酵素消化、DNA ライブラリー構築、PCR、抗体調製、ウェスタンブロットハイブリダイゼーション分析、遺伝子チップ、高度な分析などに使用できます。 -スループットシーケンスおよびその他の実験。
フォージェネ関連DNA 分離キット
動物組織 DNA 分離キット--動物組織、細胞などの複数のソースからのゲノム DNA の迅速な抽出と精製。
血液 DNA Midi キット (1-5ml)--抗凝固処理された血液 (1 ~ 5ml) から高品質のゲノム DNA を迅速に精製します。
口腔スワブ/FTA カード DNA 分離キット--口腔綿棒/FTA カードサンプルから高品質のゲノム DNA を迅速に精製します。
植物 DNA 分離キット-- 植物サンプル (多糖類やポリフェノール植物サンプルを含む) から高品質のゲノム DNA を迅速に精製して取得します。
③プラスミド抽出
プラスミドは細胞内の一種の環状小分子 DNA であり、DNA 組換えの一般的な担体です。プラスミド抽出の方法は、RNA を除去し、細菌のゲノム DNA からプラスミドを分離し、タンパク質やその他の不純物を除去して比較的純粋なプラスミドを取得することです。
一般的なプラスミド ミニ キット-- 形質転換や酵素消化などの日常的な分子生物学実験のために、形質転換細菌から高品質のプラスミド DNA を迅速に精製します。
④その他の抽出タイプ、miRNA抽出など
動物 miRNA 分離キット-- さまざまな動物組織および細胞から 20 ~ 200nt miRNA、siRNA、snRNA の低分子 RNA フラグメントを迅速かつ効率的に抽出します。
Ⅳ 核酸抽出・精製結果の要件s
① 核酸の一次構造の完全性を確保する。
②タンパク質、糖、脂質などの高分子の干渉を軽減する
③ 核酸サンプル中に酵素を阻害する可能性のある有機溶媒や高濃度の金属イオンが存在しないこと。
④ DNA 抽出時には RNA やその他の核酸の混入を除去する必要があり、またその逆も同様です。
投稿日時: 2022 年 11 月 24 日